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刺激性实验之CAMVA
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CAMVA概述
  基本原理:
    CAM即孵化的10~14天胚龄的受精鸡胚中期绒毛尿囊膜。本试验利用CAM血管系统完整、明显和透明的特点,将一定量受试物直接与CAM接触,作用一段时间之后观察CAM血管损伤,对不同的血管损伤程度进行评分,血管损伤越严重分值越大。本方法特别强调检测物的血管效应,如由此引发的鬼影血管、毛细血管充血、毛细血管出血等现象。

  应用:
   CAMVA可以根据血管的反应将刺激性量化,客观地体现人体皮肤对刺激的反应,艾卓实验室把CAMVA作为刺激性评价的主要实验。相对于斑贴试验和其它模糊的主观感觉,CAMVA可减少由于个体差异较大而引起的实验误差。   

  血管效应分类:
⑴鬼影血管(ghost vessel):指血管内无血液灌注的血管现象。
⑵充血(hypermia):指血管内血液不流动或血液充盈所致的血管膨胀现象。
⑶出血(hemorrhage):血液从血管内流出血管外,可以表现为血管外出现点状出血或絮状的弥漫性出血等多种形式。
 
  结果分析:
⑴RC50值(半数致刺激浓度值):是指能够导致50%的鸡胚显示阳性反应的被测物的浓度。
  阳性反应是指CAMVA实验中,可观察到任何的CAM血管变化,反之则为阴性反应。记录全部的阳性或阴性反应,用概率 分析计算RC50。
⑵NC值(正常使用浓度刺激值):根据CAM血管效应对应的分值做出评分,取一组数据的平均值,确定刺激性的大小。
 
  刺激性评价:

分值 表现 备注
0﹤NC≦2 应激性刺激 无损伤性刺激,此时毛细血管未有出血损伤。
2﹤NC≦3 轻微刺激 轻微损伤性刺激,此时毛细血管出现轻微性出血损伤。
3﹤NC≦5 中度刺激 较为严重的损伤性刺激,此时毛细血管出现较为严重的出血损伤,可能为不可逆伤。
NC>5 严重刺激 极为严重的损伤性刺激,此时毛细血管大面积出血,且出血量较大,为不可逆损伤。 

  评分标准:
血管效应 评分 观察描述
无反应 0 观察不到反应,CAM正常。
鬼影血管 1 血管内无血流,血管清晰。
毛细血管损伤 2 充血,或CAM小血管血流增加。
极轻微出血 3 环内有可数的细小出血点(1-10个)
轻微出血 4 环内有可数的细小出血点>10或小出血点不可数且覆盖环内区域不足1/8
极轻度出血 5 环内出血点覆盖面积1/8~1/4或环内没有出血点但红晕覆盖面积不足1/4
轻度出血 6 环内出血点覆盖面积1/4~1/2或环内没有出血点但红晕覆盖面积不足1/2
中度出血 7 环内大量出血点或小区域出血范围达到1/2~3/4
严重出血 8 环内出血点区域>3/4;结痂可能形成。
 
 
 
  常用产品的CAMVA值:


产品名称 RC50 使用浓度 NC值
对羟基苯乙酮:己二醇=4:5 2.0% 1.0% 0.3
己二醇 2.5% 2.0% 0
2.5% 1.1
Germall-plus 0.99% 0.4% 1.6
苯氧乙醇 1.14% 1.0% 0.7
丙二醇 5.0% -- --
MIT+IPBC 0.02% 0.2% 4.2
IPBC 0.06% 0.1% 5
MIT -- 0.1% 3.2
卡松(1.5%) -- 0.1% 6.1
酯+丙酯 -- 0.2%+0.1% 0
单甘油辛酸酯 -- 0.3% 0.1

CAMVA与眼睛
 
眼睛的结构及特点
 


 
眼睛对外界刺激的表现及组织反映
1.眼结膜:眼皮内部和眼球表面的一层粘膜,含有丰富的微血管及毛细血管,不含神经,是身体上最脆弱的粘膜。熬夜导致的血丝就是因为眼结膜上的血管疲劳充血所致 。眼皮表面的皮肤也是身体最脆弱的皮肤。丙二醇可无阻挡渗透进眼结膜,且不会产生严重的异物感,也不会对眼睛内部产生损伤,是多种眼药的良好载体和渗透剂。

2.泪腺:眼结膜连接泪腺。泪腺对气体更加敏感,如甲醛、乙醇、醋酸等。异物在接触到眼睛后,泪腺会迅速分泌泪液进行冲刷,同时眼结膜血液流速加快,流量加大;随之角膜产生不适感并会持续一段时间,保证泪液的分泌和眼结膜血流的增大。这就是我们眼睛受到刺激后,会长时间流泪的原因。
 
3.角膜:一层透明有弹性有厚度的膜,角膜上面没有血管但是含有丰富的神经,是身体痛觉和触觉最敏感的区域。眼睛内部基本不会受到外界影响,但某些情况下,如严重挤压碰撞、长期接触碱性物质等会损伤眼球内部。一般化妆品尤其是眼部用品尽量保证在中性附近(6˂PH˂8),尽量不要含有颗粒物或不溶物,否则容易在眼睑内部或泪腺出聚集,造成泪腺管堵塞。
 
4.眼皮从外到内分为五层结构:
①眼睑皮肤,是全身最薄的皮肤。
②皮下结缔组织,十分疏松,易于积聚水肿液或皮下出血。
③肌肉,包括三组肌肉:眼轮匝肌、上睑提肌、米勒氏肌。
④睑板,为一致密的结缔组织。
⑤睑结合膜,为眼睑的衬里,也是结合膜囊的前份,是一层透明的粘膜,构造与眼结膜基本相同。

5.眼睛对异物的刺激主要集中于眼结膜和角膜。其中眼结膜主要表现物理刺激,角膜和眼皮肌肉组织表现神经痛觉刺激。眼结膜会阻隔绝大多数的异物进入,因此眼睛刺激也主要表现为眼结膜刺激。当眼结膜长期经受刺激或腐蚀后,会长期充血,形成水泡、乳状凸起甚至损坏,此时内部眼睛损伤,甚至会永久损伤。

6.从医学构造来看,CAM和眼结膜都是通过血管和血液变化表现刺激,CAMVA可以模拟眼结膜刺激。

7.医学上有个共识,即外界对人体粘膜(眼结膜、生殖器、嘴唇、肛门、鼻腔,此顺序是粘膜对刺激表现程度的一个医学认知顺序)的损伤会远远 大于对皮肤的损伤。不同异物对粘膜和皮肤的刺激不能等同看待,但是刺激大小近似于正线性关系。
 
人体刺激:
1.刺激性概述
医学上将刺激性分为应激性刺激和损伤性刺激。损伤性刺激包括自愈性刺激和永久性刺激。
应激性刺激是身体适应环境,调节身体状态的正常反应;而损伤性刺激是身体对外部刺激无法调节时所表现的极端反应。
某种刺激源在皮肤上的刺激性表现因人而异,但持续的应激性刺激可能会发展成损伤性刺激,如人体对低温的刺激,当身体突然处于低温环境时,会心跳加速、毛孔收缩,这是应激性刺激;但是当身体某部分长期处于低温环境时可能会产生冻疮,这就是损伤性刺激的表现。身体的过敏反应一般是应激性刺激过度表现的结果,可能会发展为损伤性刺激,甚至进展为永久性刺激。
任何外源性物质在特定条件和环境下均会对身体产生刺激性。

2.化妆品刺激性来源
化妆品作为多种化学物质及自然提取物的融合品和集大成者,成分复杂,对不同人群的刺激性也会有不同的表现。
化妆品的刺激性主要来自表面活性剂、香精、防腐剂、其它微量添加剂等。
通过选择低刺激性表活、香精,降低表活、香精用量可明显降低其刺激性。
选择防腐剂替代品或者不用防腐剂可降低化妆品刺激性。
通过添加皮肤保护物质或抗敏剂可明显降低化妆品刺激性。
 
3.抑菌剂与刺激性
抑菌剂作为外源性化合物都有或多或少的刺激性。但不同的抑菌剂对身体的刺激性不同。在极低浓度情况下,刺激性往往较小,从而被人忽视。
大多数抑菌剂,即便是在较低浓度情况下,在持续接触使用中仍然会造成身体的应激性刺激甚至损伤性刺激,如MIT、甲醛缓释体等。
某些抑菌剂即便在极低浓度下也具有较强的刺激性,且易感人群较大,如卡松等。
某些抑菌剂本身刺激性较小,但是其下游分解产物却有较大的刺激性,甚至会有强烈的毒性和致癌性,如布罗波尔、IPBC、丁羟茴醚等。
某些抑菌剂在高剂量下也只会造成应激性刺激,而极难对身体产生损伤,如苯氧乙醇、辛甘醇等。此类抑菌剂在低浓度条件对人体几乎无刺激,且此类抑菌剂的易感人群较小。